Kit de reagentes em solução 63 series

para PCR em tempo realpara ácidos nucleicosde fosfato

As medições dos níveis de expressão do ARNm - quer por análise Northern, proteção contra ribonuclease ou PCR quantitativa em tempo real - são normalmente normalizadas através da comparação dos dados com os obtidos para um gene de referência interno ou endógeno. Os genes de referência, como a beta-actina e a gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH), são mais frequentemente utilizados porque se espera que os seus níveis de expressão se mantenham constantes em diferentes condições de tratamento. Infelizmente, este pressuposto nem sempre é válido e os resultados baseados apenas em genes housekeeping podem ser tendenciosos (Suzuki, Higgins e Crawford 2000). Um método melhor é normalizar os dados utilizando o nosso cDNA de Referência Humana qPCR, o único controlo de cDNA derivado inteiramente de tecidos humanos. o cDNA de referência humano qPCR é o controlo ideal para comparar dados de diferentes experiências de PCR quantitativo (qPCR). Uma vez que é preparado a partir de um pool de ARN total recolhido de vários tecidos diferentes, o nosso cDNA de referência humano qPCR proporciona uma ampla cobertura genética, como demonstrado pela análise de microarray do material de partida de ARN. O ARN e, por conseguinte, o cADN, preparado a partir de tecidos inteiros, proporciona uma melhor representação dos genes com menos variação do que o ARN produzido a partir de linhas celulares (dados não apresentados). Além disso, a análise por PCR mostra que o nosso ARN total está praticamente isento de ADN genómico. Isto permite uma medição mais exacta do número de cópias dos transcritos. Tanto os genes de alta como de baixa abundância estão bem representados, permitindo a preparação de uma vasta gama de padrões diluídos em série para cada ensaio qPCR. A variação de lote para lote do cDNA de referência é mínima porque a fonte de ARN é preparada à escala industrial.