A T4 DNA Ligase catalisa a formação de uma ligação fosfodiéster entre o 5'-fosfato e o 3'-hidroxilo adjacentes na extremidade romba ou coesiva do dsDNA. Pode também catalisar a ligação de ARN com ARN-s ou ARN em ácidos nucleicos de cadeia dupla. No entanto, não pode catalisar ligações entre nucleótidos de cadeia simples. A T4 DNA Ligase pode ser utilizada na marcação da extremidade 3'do ARN, na ciclização de oligonucleótidos de ARN e ADN, na clonagem de ADNc e noutras manipulações de ácidos nucleicos.
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