O Ni Focurose FF (TED) é um método de purificação que utiliza a interação entre o Ni2+ e determinados aminoácidos (principalmente histidina, cisteína e triptofano) nas cadeias laterais das proteínas para separação e purificação. É adequado para a purificação de proteínas marcadas com His e outras biomoléculas que interagem com Ni2+. A forte propriedade quelante do Ni2+ permite a aplicação direta na purificação de proteínas marcadas com His expressas em sistemas de secreção eucarióticos, tolerando níveis mais elevados de agentes redutores e quelantes sem necessidade de pré-tratamento da amostra. A resina pode ser facilmente limpa e regenerada sem remoção de níquel, permitindo a limpeza direta com NaOH.
Caraterísticas
Rápida e simples (purificação num só passo)
Tolera níveis mais elevados de agentes redutores e quelantes, permitindo a aplicação direta de proteínas His-tagged expressas em sistemas de secreção eucarióticos sem pré-tratamento, maximizando a preservação da atividade proteica.
Não necessita de remoção de níquel, permitindo a limpeza direta com NaOH, encurtando significativamente o ciclo de limpeza.
Menor lixiviação de níquel em comparação com os tradicionais Ni Focurose FF (IDA) e Ni FocuroseFF (IMAC), eliminando a necessidade de regeneração repetitiva.
Parâmetros de desempenho
Agarose a 6% altamente reticulada
Faixa de tamanho de partícula
45-165µm
Tamanho médio das partículas (D50)
90±5µm
Capacidade de ligação
≥10 mg (proteína marcada com His)/mL (resina)
estabilidade do pH
3-12 (longo prazo) 2-14 (curto prazo)
Estabilidade química
0.01M HCl, 0.01M NaOH (uma semana)
20mM EDTA, 10mM DTT, 1M NaOH, 8M ureia, 6M HCl guanidina (24 horas)
100mM EDTA, 0,5M imidazol (2 horas) 30% isopropanol (20 minutos)
Velocidade de fluxo linear (0,3 MPa)
≥300 cm/h
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